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LipoHighTM脂质体转染试剂

时间:2017.10.11
    LipoHighTM脂质体转染试剂
产品简介
LipoHighTM脂质体转染试剂(LipoHighTM Transfection Reagent )是一种适合于把质粒或其它形式的核酸转染到培养的真核细胞中的高效阳离子脂质体转染试剂。
LipoHighTM 优点:
1、转染效率高,重复性好,操作简单。
2、细胞毒性低。
3、LipoHighTM对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用,并且可以用于稳定表达细胞株的筛选。
LipoHighTM 脂质体转染试剂使用说明 :
1. 细胞培养:以六孔板为例,在转染前(6-24小时)把约 0.4×106 细胞(具体的细胞数量据细胞大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内,使细胞汇合度(confluent)能达到约50% ~70%。
ü 注:其它培养板或培养皿参考六孔板进行操作,各种培养介质如培养板,培养皿的详细细胞接种数目推荐《各种培养皿条件下LipoHighTM 转染前细胞接种数量级详表》。
2. 在进行下述转染步骤前,把六孔板每孔内换成2 ml新鲜的细胞培养液。
ü 注:其他培养介质培养液体积参见《各种培养皿条件下LipoHighTM转染 DNA详表》。
3. 对于待转染的六孔板中一个孔的细胞,取一只洁净无菌离心管,加入4 μg质粒DNA到250 μl Opti-MEM溶液,用枪轻轻吹打混匀。
ü 注:其他培养介质培养液体积参见《各种培养皿条件下LipoHighTM 转染 DNA 详表》,如根据实验需要,Opti-MEM可用其他如无血清的DMEM、1640、MEM、F12 等培养基代替
4. 取另一只洁净无菌离心管,加入250 μl Opti-MEM溶液,再加入12 μl LipoHighTM其他培养介质LipoHighTM用量参见附表),用枪轻轻吹打混匀,室温放置2-3分钟。
5. 将步骤3与4中的DNA溶液与LipoHighTM溶液混合,用枪吹打混匀, 室温孵育15分钟。
6. 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞,均把500 μl LipoHighTM-DNA混合物全部均匀地滴加入六孔板的单孔内,随后轻轻混匀。
7. 细胞培养箱内培养6小时后,去除含有LipoHighTM-DNA的培养液。每孔加入2ml新鲜含血清的细胞培养液继续培养。
ü 注:通常LipoHighTM-DNA混合物和细胞一起孵育6小时已经足够产生较高的转染效率。大多数细胞和LipoHighTM-DNA一起培养长达72小时未见明显细胞毒性。但转染后6小时更换新鲜培养液对于一些生长非常快速的细胞有助于提高转染效率。对一些比较易于转染的细胞如 HEK293T细胞,换液可视细胞生长状况而定,无需为提高转染效率而换液。
8. 转染后续处理:对于基因表达,再培养24-40小时后即可检测转染效果,如转染带GFP或者其他荧光蛋白基因的表达载体,可用荧光显微镜观测细胞转染效率。用于筛选稳定表达细胞株,则在转染后24小时即可加入适当的筛选药物,例如G418 或Puromycin(嘌呤霉素)等,进行稳定表达筛选。
关于优化转染条件:
1. 对于用六孔板培养的细胞,LipoHighTM的用量则是相对固定的,即用什么样的孔板,孔板中的装培养液的体积不调整,比如6孔板是2ml,对应LipoHighTM的用量是12ul一般保持不变。DNA用量可以在1.6~5μg的范围内进行适当调节,而最佳的转染条件,因具体的细胞和培养条件而定,可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的LipoHighTM和DNA混合物配置在一个离心管内,后续混匀孵育等步骤后可以分加到各个孔内。
2. 对于其它培养板或培养器皿,各种试剂的用量可以参考《各种培养介质下LipoHighTM转染DNA 详表》进行换算。

各种培养皿条件下LipoHighTM转染前细胞接种数量级详表

 
各种培养介质下LipoHighTM转染DNA详表

报价表

产品编号 产品名称 规格 价格
TY053442-200 LipoHighTM
脂质体转染试剂
200 μl ¥388
TY053442-1000 1 ml ¥1088
TY053442-2000 2 ml ¥1688
 

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